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CIRCLE-Seq，將gDNA打斷并環(huán)化，環(huán)化的DNA與CRISPR/RNP孵育，NGS測(cè)序檢測(cè)線性化的DNapian段，確定脫靶位點(diǎn)。PCR富集后測(cè)序，成本相對(duì)較低，能檢測(cè)低頻脫靶突變。安必奇sgRNA脫靶效應(yīng)評(píng)估，安必奇生物提供sgRNA脫靶效應(yīng)評(píng)估服務(wù)，幫助您挑選高度特異，脫靶率低的sgRNA進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。同時(shí)，我們也協(xié)助您檢測(cè)分析基因編輯后細(xì)胞樣品的脫靶情況，通過各種高通量測(cè)序檢測(cè)技術(shù)，我們能準(zhǔn)確的分析全基因組范圍內(nèi)的脫靶位點(diǎn)，推動(dòng)CRISPR/Cas9技術(shù)在zhiliao藥物開發(fā)和臨床研究中的應(yīng)用。我們的優(yōu)勢(shì)：靈敏度高：能檢測(cè)低頻脫靶突變★準(zhǔn)確性高：檢測(cè)結(jié)果可通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證★多種檢測(cè)...

插入突變風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估一些整合性載體（如逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒、轉(zhuǎn)座子）可將外源基因插入整合到細(xì)胞基因組中，這可能會(huì)導(dǎo)致關(guān)鍵基因突變或jihuo原基因，從而導(dǎo)致惡性liu風(fēng)險(xiǎn)增加。影響插入突變的關(guān)鍵風(fēng)險(xiǎn)因素包括：（1）載體的整合特征，如插入位點(diǎn)的偏好性；（2）載體的設(shè)計(jì)，如增強(qiáng)子、啟動(dòng)子等構(gòu)建元件的活性，影響鄰近基因的潛力；產(chǎn)生剪接突變體的潛在剪接位點(diǎn)或多聚腺苷酸信號(hào)等；（3）細(xì)胞載體拷貝數(shù)；4）轉(zhuǎn)基因表達(dá)產(chǎn)物的功能活性（如與細(xì)胞生長調(diào)控相關(guān)）和表達(dá)水平；5）靶細(xì)胞群的轉(zhuǎn)化可能性，這可能與細(xì)胞的分化狀態(tài)、增殖潛力、體外培養(yǎng)條件和體內(nèi)植入環(huán)境等有關(guān)。如何降低脫靶效應(yīng)？選擇特異的gRNA； 使用RNP； 使...

誘導(dǎo)多能干細(xì)胞來源的細(xì)胞產(chǎn)品。誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（inducedpluripotentstemcell，iPS）自身具有致瘤性風(fēng)險(xiǎn)，在體內(nèi)可形成畸胎瘤，整合病毒載體的使用和誘導(dǎo)多能性可能增加iPS細(xì)胞插入致突變性和致性的風(fēng)險(xiǎn)。因此，應(yīng)在shou次臨床試驗(yàn)前完成致瘤性試驗(yàn)。若設(shè)計(jì)科學(xué)合理，能夠滿足評(píng)價(jià)要求，也可在持續(xù)時(shí)間足夠長的毒性研究中評(píng)估致瘤性風(fēng)險(xiǎn)。體內(nèi)致瘤性試驗(yàn)建議采用摻入未分化iPS細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)品作為陽性對(duì)照，以確認(rèn)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的靈敏度。如果iPS細(xì)胞設(shè)計(jì)了機(jī)制以降低致瘤風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)在體內(nèi)試驗(yàn)中確認(rèn)/驗(yàn)證此類機(jī)制的功能 脫靶檢測(cè)技術(shù)是一系列針對(duì)CRISPR/Cas9系統(tǒng)作用機(jī)制研發(fā)的用于確定CR...

改進(jìn)Cas變體使用SpCas9和SaCas9 變體：已研發(fā)出諸如SpCas9-Nickase、dCas9 、dCas9–FokI、xCas9、Cas9-NG、evoCas9、SpCas9 – HFI、eSpCas9和Hypa-Cas9等多種Cas變體，可降低脫靶效應(yīng)。改進(jìn)的Cas9同源物具有更廣的PAM功能和特異性：實(shí)驗(yàn)表明Cpf1、CRISPR-Cpf1-RNP可降低脫靶效應(yīng)。CRISPR 遞送方法：基于病毒的遞送方法：腺病毒 (AdV) 顯示出整合到靶細(xì)胞基因組中的微弱潛力，這一特征有利于限制脫靶效應(yīng)。然而，AdVs 會(huì)引發(fā)免疫反應(yīng)，目前還不能完全排除它與宿主基因組整合的可能性。非病毒遞送...

基因zhiliao產(chǎn)品特有的可能會(huì)引起遲發(fā)性不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)因素包括：基因組整合活性基因zhiliao產(chǎn)品可能會(huì)采用修飾宿主基因組的技術(shù)，并有可能在宿主細(xì)胞或組織中持續(xù)存在。很多基因zhiliao載體的基因整合不會(huì)指向基因組的特定位點(diǎn)，可能在整合位點(diǎn)處產(chǎn)生插入突變、或jihuo整合位點(diǎn)附近的原基因等，進(jìn)而破壞重要基因功能或增加惡性liu的風(fēng)險(xiǎn)，例如，國外已有多項(xiàng)研究報(bào)告在接受了使用γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的基因修飾細(xì)胞zhiliao的受試者中發(fā)生白血病。因此，對(duì)于存在此類風(fēng)險(xiǎn)的產(chǎn)品，有必要進(jìn)行長期隨訪臨床研究以評(píng)估出現(xiàn)遲發(fā)不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。脫靶檢測(cè)服務(wù)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測(cè)效率高...

CRISPR基于sgRNA與基因組序列互補(bǔ)定位到靶位點(diǎn)，不論哪種CRISPR系統(tǒng)，都存在sgRNA序列不完全匹配但能夠結(jié)合基因組的脫靶現(xiàn)象，CRISPR定位到脫靶位點(diǎn)引發(fā)序列改變就屬于第二類風(fēng)險(xiǎn)。CRISPR技術(shù)誕生剛過10年，期間迅速取代TALEN和ZFN，成為學(xué)術(shù)界通用的基因編輯技術(shù)，也徹底改變了我們的生物學(xué)研究方法。為提高CRISPR技術(shù)的安全性，特別是往臨床應(yīng)用發(fā)展時(shí)的安全性問題，研究者們一直以提高靶位點(diǎn)的編輯效率和準(zhǔn)確性，同時(shí)降低脫靶位點(diǎn)編輯發(fā)生概率為目標(biāo)，來優(yōu)化CRISPR技術(shù)。另一方面，研究者們也開發(fā)了大量檢測(cè)方法，用于檢測(cè)CRISPR的靶向風(fēng)險(xiǎn)和脫靶風(fēng)險(xiǎn)，用于早期sgRNA序列...

基于已有科學(xué)經(jīng)驗(yàn)和既往非臨床/臨床研究結(jié)果，如果認(rèn)為基因修飾細(xì)胞所采用的載體系統(tǒng)可將外源基因整合到細(xì)胞基因組中并可在體內(nèi)長期存續(xù)，需綜合分析以上風(fēng)險(xiǎn)因素，評(píng)估潛在的插入突變、致瘤/致性風(fēng)險(xiǎn)。非臨床研究，應(yīng)采用具有代表性的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)行基因整合位點(diǎn)分析，分析細(xì)胞的克隆組成以及在關(guān)注基因（如liu相關(guān)調(diào)控基因）附近有無優(yōu)先整合跡象，含有關(guān)注整合位點(diǎn)的細(xì)胞有無優(yōu)先異常增殖。對(duì)于嵌合抗原受體（Chimericantigenreceptor，CAR）或T細(xì)胞受體（Tcellreceptor，TCR）修飾的免疫細(xì)胞，應(yīng)盡可能采用多種方法評(píng)估其靶點(diǎn)相關(guān)毒性和脫靶毒性風(fēng)險(xiǎn)。脫靶檢測(cè)安全性評(píng)價(jià)，推薦唯可生物，...

自基因zhiliao出現(xiàn)之日起，安全性問題就隨之產(chǎn)生了，并成為阻礙基因zhiliao研發(fā)的一大障礙，吳寧博士認(rèn)為：“基因zhiliao產(chǎn)品的研發(fā)和上市，安全性會(huì)將是一個(gè)非常重要考量。如果一款產(chǎn)品它安全性有問題的話，在市場(chǎng)化道路上就會(huì)受到很大影響。尤其是基因zhiliao，目前處于起始階段，一旦出現(xiàn)不良事件，很有可能對(duì)整個(gè)行業(yè)都會(huì)產(chǎn)生致命打擊。具體說來，基因zhiliao的安全性問題主要涉及基因插入突變、脫靶、生物分布和持久性、潛伏再jihuo以及潛在免疫原性等。”隨著脫靶影響因素、降低策略及脫靶檢測(cè)技術(shù)研究的不斷深入，未來CRISPR/Cas9系統(tǒng)將在更多領(lǐng)域造福人類。廣州種子脫靶檢測(cè)評(píng)估檢測(cè)...

細(xì)胞經(jīng)基因修飾后會(huì)改變其生物學(xué)特性，同時(shí)也會(huì)帶來新的安全性風(fēng)險(xiǎn)，如基因編輯脫靶風(fēng)險(xiǎn)、載體插入突變風(fēng)險(xiǎn)、載體重組風(fēng)險(xiǎn)、表達(dá)的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物的風(fēng)險(xiǎn)等。在制定非臨床研究計(jì)劃時(shí)，除參考《細(xì)胞zhilliao產(chǎn)品研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》（試行）中的對(duì)細(xì)胞zhilliao產(chǎn)品的一般要求外，還應(yīng)具體問題具體分析，基于產(chǎn)品特點(diǎn)和目前已有的科學(xué)認(rèn)知，結(jié)合擬定適應(yīng)癥、患者人群、給藥途徑和給yaofang案等方面的考慮，科學(xué)合理的設(shè)計(jì)和實(shí)施非臨床研究，充分表征產(chǎn)品的藥理學(xué)、毒理學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)特征。在進(jìn)行獲益風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估時(shí)，還應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注由非臨床向臨床過渡時(shí)非臨床研究的局限性和風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)的不確定性。可以與靶基因之外的其他基因作用...

檢測(cè)方法的敏感度、特異性和可重復(fù)性應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證，并設(shè)計(jì)適當(dāng)?shù)年栃院完幮詫?duì)照；當(dāng)體內(nèi)靶細(xì)胞或替代細(xì)胞中載體序列陽性的比例超出預(yù)期范圍時(shí)，應(yīng)開展克隆性生長的評(píng)估。如果存在優(yōu)勢(shì)克隆或單克隆生長，應(yīng)在不超過3個(gè)月的時(shí)間內(nèi)再次檢測(cè)確認(rèn)，并盡快開展整合位點(diǎn)的分析。當(dāng)載體的整合位點(diǎn)確定后，應(yīng)與人類基因組數(shù)據(jù)庫及基因組的其他數(shù)據(jù)庫等進(jìn)行比較，確定整合位點(diǎn)的基因功能，評(píng)估是否與包括zheng在內(nèi)的任何疾病有關(guān)。如果受試者體內(nèi)出現(xiàn)載體陽性細(xì)胞的克隆性生長，或檢測(cè)發(fā)現(xiàn)基因整合位點(diǎn)在基因或相關(guān)基因附近，應(yīng)縮短檢測(cè)間隔至不超過3個(gè)月并密切監(jiān)測(cè)惡性liu征兆，直至檢測(cè)不到基因zhiliao載體。檢測(cè)脫靶效應(yīng)比較好的方法:C...

如何檢測(cè)脫靶效應(yīng)？在gRNA修飾中，截短的sgRNA是一種減少脫靶效應(yīng)的簡單方法，并且基于RNP的遞送在大多數(shù)情況下適用于獲得更高的目標(biāo)活性。此外，選擇合適的Cas變體對(duì)于減少脫靶效應(yīng)也至關(guān)重要。但選擇合適的脫靶檢測(cè)工具，也是重中之重。脫靶預(yù)測(cè)結(jié)合PCR檢測(cè)法，利用脫靶預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)潛在的脫靶位點(diǎn)，PCR擴(kuò)增預(yù)測(cè)的脫靶位點(diǎn)，利用直接測(cè)序或酶切法檢測(cè)脫靶情況。操作簡便、成本低偏倚性預(yù)測(cè)。全基因組測(cè)序，一種通過高通量測(cè)序檢測(cè)脫靶突變的方法，需要選擇適當(dāng)?shù)膮⒖蓟蚪M過濾背景突變，數(shù)據(jù)比對(duì)分析獲得含有PAM基序的潛在修飾位點(diǎn)，進(jìn)一步基因擴(kuò)增驗(yàn)證其突變情況。高通量全基因組范圍檢測(cè)可檢測(cè)SNPs，Indel...

由于設(shè)計(jì)的sgRNA會(huì)與非靶點(diǎn)DNA序列錯(cuò)配，引入非預(yù)期的基因突變，即脫靶效應(yīng)(Off-targeteffects)。脫靶效應(yīng)造成了研究中的許多不確定性，這無疑限制了該技術(shù)的應(yīng)用。因此，研究者希望能開發(fā)有效的方法來檢測(cè)脫靶效應(yīng)。在目前主流的脫靶效應(yīng)評(píng)估方法中，有一種方法為GUIDE-seq，其原理是利用一種短的雙鏈寡聚核苷酸（dsODN）標(biāo)記CRISPR/Cas誘導(dǎo)的脫靶斷裂，然后對(duì)標(biāo)簽所在的基因組區(qū)域進(jìn)行高通量測(cè)序，通過生物信息學(xué)分析從而確定脫靶位點(diǎn)。利用該技術(shù)可以在基因組范圍內(nèi)檢測(cè)CRISPR脫靶效應(yīng)，從而改變了以往先預(yù)測(cè)假定脫靶位點(diǎn)再檢測(cè)的思路；與其他的評(píng)估方法相比，GUIDE-seq更...

2022年2月下旬，在醫(yī)麥客舉辦的年度盛會(huì)——“蓄力前行，助航新生——2021 CSGCT基因與細(xì)胞zhiliao醫(yī)學(xué)峰會(huì)”期間，唯可生物創(chuàng)始人兼CEO-吳寧博士分享了唯可生物在基因zhiliao賽道針對(duì)安全性展開的技術(shù)服務(wù)，讓在場(chǎng)行業(yè)大咖和觀眾真正領(lǐng)會(huì)到ISA(integration site analysis，整合位點(diǎn)插入分析)領(lǐng)域國際金標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，以及基因編輯定量脫靶檢測(cè)、載體拷貝數(shù)檢測(cè)、載體質(zhì)量控制等多項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)的行業(yè)意義。吳寧博士畢業(yè)于德國海德堡大學(xué)，德國國家aizheng研究中心(DKFZ)，并于2021年3月同幾位合伙人聯(lián)合創(chuàng)立了上海唯可生物科技有限公司。其創(chuàng)始團(tuán)隊(duì)擁有的檢測(cè)...

先導(dǎo)編輯器：CBE和ABE組合使用可以有效地進(jìn)行4種堿基轉(zhuǎn)換（C→T, G→A, A→G, T→C），而無需產(chǎn)生DSB，然而除了這4種堿基轉(zhuǎn)換，對(duì)另外8種堿基轉(zhuǎn)換（C→A, C→G, G→C, G→T, A→C, A→T, T→A, T→G）以及堿基的插入和缺失，依然缺乏有效的研究工具。先導(dǎo)編輯器（Prime Editor, PE），PE在不依賴DSB和供體DNA的條件下便可有效實(shí)現(xiàn)所有12種堿基轉(zhuǎn)換，此外還能有效實(shí)現(xiàn)多堿基的精細(xì)插入（較多可插入44bp）和刪除（較多刪除80bp）。> 抗CRISPR蛋白。抗CRISPR（Acr）蛋白是天然的CRISPR/Cas系統(tǒng)抑制劑，由各種可移動(dòng)遺傳元件...

基因編輯定量脫靶檢測(cè):基因編輯定量脫靶檢測(cè),使用CRISPR/Cas9、ZFNs和TALENs等設(shè)計(jì)核酸酶進(jìn)行基因組編輯，可以將遺傳物質(zhì)定向?qū)氩溉閯?dòng)物基因組的特定位點(diǎn)。然而，可能會(huì)出現(xiàn)非預(yù)期的靶上和靶外基因組修飾，這可能導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，并破壞正常基因的功能，從而可能導(dǎo)致臨床前和臨床研究中的安全問題。.基于PCR的檢測(cè)唯可生物采用LTA-PCR方法分析基因組編輯引起的靶向和非靶向整合。1.方便地檢測(cè)脫靶目標(biāo)變化和隨機(jī)性2.適用于解決監(jiān)管機(jī)構(gòu)提出的具體問題3.定制化生物信息學(xué)分析基于NGS的檢測(cè)唯可生物使用靶向富集測(cè)序(TES)進(jìn)行全基因組檢測(cè)和定量靶向和非靶向改變。我們可在一次反應(yīng)中經(jīng)濟(jì)高效...

臨床研究人群，如果一種基因zhiliao產(chǎn)品具有引起遲發(fā)性不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，需要開展長期隨訪觀察時(shí)，所有接受基因zhiliao產(chǎn)品的受試者在簽署知情同意書后均應(yīng)入組長期隨訪臨床研究。在設(shè)計(jì)長期隨訪臨床研究的方案時(shí)，應(yīng)考慮目標(biāo)受試者人群及特征、整體健康情況以及接受zhiliao的患者的預(yù)期生存期等特征對(duì)遲發(fā)性不良反應(yīng)的收集的影響。通常來說，當(dāng)臨床研究人群的某些特征（如預(yù)期壽命短、多重合并癥、以及暴露于放療或化療等其他藥物）可能干擾遲發(fā)性不良反應(yīng)的觀察分析時(shí)，會(huì)影響長期隨訪觀察在評(píng)估和減輕受試者風(fēng)險(xiǎn)方面的效用；而在病情較輕或較局限，合并癥以及伴隨zhiliao有限或較穩(wěn)定的受試者中，通過長期隨訪觀察...

如何檢測(cè)脫靶效應(yīng)？在gRNA修飾中，截短的sgRNA是一種減少脫靶效應(yīng)的簡單方法，并且基于RNP的遞送在大多數(shù)情況下適用于獲得更高的目標(biāo)活性。此外，選擇合適的Cas變體對(duì)于減少脫靶效應(yīng)也至關(guān)重要。但選擇合適的脫靶檢測(cè)工具，也是重中之重。脫靶預(yù)測(cè)結(jié)合PCR檢測(cè)法，利用脫靶預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)潛在的脫靶位點(diǎn)，PCR擴(kuò)增預(yù)測(cè)的脫靶位點(diǎn)，利用直接測(cè)序或酶切法檢測(cè)脫靶情況。操作簡便、成本低偏倚性預(yù)測(cè)。全基因組測(cè)序，一種通過高通量測(cè)序檢測(cè)脫靶突變的方法，需要選擇適當(dāng)?shù)膮⒖蓟蚪M過濾背景突變，數(shù)據(jù)比對(duì)分析獲得含有PAM基序的潛在修飾位點(diǎn)，進(jìn)一步基因擴(kuò)增驗(yàn)證其突變情況。高通量全基因組范圍檢測(cè)可檢測(cè)SNPs，Indel...

CRISPR/Cas9的問題：和TALEN和ZFNS技術(shù)一樣，CRISPR/Cas9技術(shù)在應(yīng)用時(shí)也存在一定概率的脫靶問題——Cas9核酸酶在非目標(biāo)位點(diǎn)發(fā)生切割，引入非預(yù)期的基因突變。脫靶切割引入的突變可能會(huì)直接破壞細(xì)胞的基本功能，帶來不可預(yù)控的嚴(yán)重后果。如何減輕脫靶效應(yīng)？gRNA的GC含量：gRNA 的序列結(jié)構(gòu)對(duì)CRISPR/Cas9基因編輯的靶向活性有影響。gRNA 序列中 40%–60%的 GC 含量可以增加靶向活性，因?yàn)檩^高的 GC 含量穩(wěn)定了DNA：RNA 雙鏈體并破壞了脫靶結(jié)合。gRNA-on-gRNA序列的位置對(duì)編輯有影響，位于四個(gè)核苷酸末端的嘌呤殘基可以提高編輯效率。鳥嘌呤優(yōu)先選...

CIRCLE-seq和CHANGE-seq與SITE-seq同期發(fā)表的CIRCLE-seq一定程度上解決了SITE-seq的一些問題。CIRCLE-seq的第一步是將純化后的基因組DNA隨機(jī)打斷成300bp左右的片段，然后首尾相連成環(huán)狀DNA，這種方法很好地避免了DNA隨機(jī)斷裂造成的背景噪聲。實(shí)驗(yàn)的第二步是用Cas9切割環(huán)狀DNA，再連上接頭并進(jìn)行雙端測(cè)序，這樣就可以在一次測(cè)序中同時(shí)獲取切割位點(diǎn)的兩側(cè)序列，彌補(bǔ)了SITE-seq的另一個(gè)缺點(diǎn)。CIRCLE-seq從總體上來說要優(yōu)于SITE-seq，但是將基因組DNA隨機(jī)打斷后成環(huán)的效率并不高，所以同一作者在3年后發(fā)表了CHANGE-seq，用T...

改進(jìn)Cas變體使用SpCas9和SaCas9 變體：已研發(fā)出諸如SpCas9-Nickase、dCas9 、dCas9–FokI、xCas9、Cas9-NG、evoCas9、SpCas9 – HFI、eSpCas9和Hypa-Cas9等多種Cas變體，可降低脫靶效應(yīng)。改進(jìn)的Cas9同源物具有更廣的PAM功能和特異性：實(shí)驗(yàn)表明Cpf1、CRISPR-Cpf1-RNP可降低脫靶效應(yīng)。CRISPR 遞送方法：基于病毒的遞送方法：腺病毒 (AdV) 顯示出整合到靶細(xì)胞基因組中的微弱潛力，這一特征有利于限制脫靶效應(yīng)。然而，AdVs 會(huì)引發(fā)免疫反應(yīng)，目前還不能完全排除它與宿主基因組整合的可能性。非病毒遞送...

基因編輯定量脫靶檢測(cè):基因編輯定量脫靶檢測(cè),使用CRISPR/Cas9、ZFNs和TALENs等設(shè)計(jì)核酸酶進(jìn)行基因組編輯，可以將遺傳物質(zhì)定向?qū)氩溉閯?dòng)物基因組的特定位點(diǎn)。然而，可能會(huì)出現(xiàn)非預(yù)期的靶上和靶外基因組修飾，這可能導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，并破壞正常基因的功能，從而可能導(dǎo)致臨床前和臨床研究中的安全問題。.基于PCR的檢測(cè)唯可生物采用LTA-PCR方法分析基因組編輯引起的靶向和非靶向整合。1.方便地檢測(cè)脫靶目標(biāo)變化和隨機(jī)性2.適用于解決監(jiān)管機(jī)構(gòu)提出的具體問題3.定制化生物信息學(xué)分析基于NGS的檢測(cè)唯可生物使用靶向富集測(cè)序(TES)進(jìn)行全基因組檢測(cè)和定量靶向和非靶向改變。我們可在一次反應(yīng)中經(jīng)濟(jì)高效...

國內(nèi)外基因zhiliao產(chǎn)品開展的非臨床研究、長期隨訪獲得的臨床經(jīng)驗(yàn)以及基因組整合位點(diǎn)分析方法的明顯改進(jìn)，都有助于更好地理解整合性基因zhiliao載體相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)。通常認(rèn)為，很多能夠介導(dǎo)外源基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞核的載體（如逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、轉(zhuǎn)座子元件和基因編輯產(chǎn)品等）有基因組整合潛力，需要通過長期隨訪觀察遲發(fā)性不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)；根據(jù)目前的認(rèn)識(shí)和研究數(shù)據(jù)，質(zhì)粒、痘病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒（AAV）等載體的基因zhiliao產(chǎn)品整合風(fēng)險(xiǎn)較低，國際上開展的臨床試驗(yàn)中也表現(xiàn)出較低的遲發(fā)性不良反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)。當(dāng)載體或基因zhiliao產(chǎn)品原有的風(fēng)險(xiǎn)特征增加時(shí)，例如經(jīng)過修飾以攜帶基因組編輯成分的質(zhì)粒或改變給yaofang式以...

對(duì)基于慢病毒/逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的基因zhiliao產(chǎn)品，如出現(xiàn)與可復(fù)制xingbing毒可能相關(guān)的不良事件，還應(yīng)開展可復(fù)制xingbing毒（replicablecompetentlentivirus/retrovirus，RCL/RCR）的檢測(cè)。關(guān)于基因編輯產(chǎn)品的特殊考慮基因編輯產(chǎn)品除了適用基因zhiliao產(chǎn)品的一般考慮以及整合性載體的特殊考慮外，長期隨訪中還應(yīng)額外關(guān)注脫靶風(fēng)險(xiǎn)，量化評(píng)估脫靶活性和在靶活性之間的相關(guān)性，或利用在靶活性來預(yù)測(cè)脫靶活性的水平。如果基因zhiliao產(chǎn)品通過全身給yaofang式遞送，長期隨訪中的安全性監(jiān)測(cè)不僅包括靶qiguan或靶組織的脫靶活性，而且還應(yīng)包括可能發(fā)...

細(xì)胞經(jīng)基因修飾后會(huì)改變其生物學(xué)特性，同時(shí)也會(huì)帶來新的安全性風(fēng)險(xiǎn)，如基因編輯脫靶風(fēng)險(xiǎn)、載體插入突變風(fēng)險(xiǎn)、載體重組風(fēng)險(xiǎn)、表達(dá)的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物的風(fēng)險(xiǎn)等。在制定非臨床研究計(jì)劃時(shí)，除參考《細(xì)胞zhilliao產(chǎn)品研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》（試行）中的對(duì)細(xì)胞zhilliao產(chǎn)品的一般要求外，還應(yīng)具體問題具體分析，基于產(chǎn)品特點(diǎn)和目前已有的科學(xué)認(rèn)知，結(jié)合擬定適應(yīng)癥、患者人群、給藥途徑和給yaofang案等方面的考慮，科學(xué)合理的設(shè)計(jì)和實(shí)施非臨床研究，充分表征產(chǎn)品的藥理學(xué)、毒理學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)特征。在進(jìn)行獲益風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估時(shí)，還應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注由非臨床向臨床過渡時(shí)非臨床研究的局限性和風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)的不確定性。值得收藏的CRISPR脫靶檢測(cè)...

CIRCLE-seq原理。細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)方法由于提純的基因組已經(jīng)消化去除了組蛋白，結(jié)構(gòu)較細(xì)胞內(nèi)的染色質(zhì)更為松散，理論上容易找到更多的脫靶位點(diǎn)。為捕獲CRISPR在細(xì)胞內(nèi)工作時(shí)真實(shí)發(fā)生的脫靶切割，研究者們也設(shè)計(jì)了一些細(xì)胞內(nèi)的脫靶位點(diǎn)檢測(cè)方法。1) Guide-seqCRISPR造成DNA雙鏈斷裂后，由于DNA修復(fù)機(jī)制的存在，斷裂處很快就會(huì)重新連接，這時(shí)候提純基因組DNA很難保留CRISPR造成的DNA斷裂位點(diǎn)。所以為了記錄細(xì)胞內(nèi)真實(shí)的CRISPR脫靶切割，研究者們?cè)O(shè)計(jì)了Guide-seq[10]，利用NHEJ的DNA修復(fù)機(jī)制，將一段雙鏈短核苷酸序列（dsODN）連接到CRISPR造成的DNA雙鏈斷裂...

CRISPR/Cas系統(tǒng)是細(xì)菌和古細(xì)菌在不斷進(jìn)化的過程中產(chǎn)生的適應(yīng)性免疫防御機(jī)制，它應(yīng)用CRISPR RNA（crRNA）以堿基互補(bǔ)的形式引導(dǎo)相應(yīng)的Cas蛋白識(shí)別入侵的外源基因組，并對(duì)其DNA進(jìn)行剪切，用以保護(hù)自身的基因組免受外源核酸如噬菌體、病毒等的干擾和破壞。經(jīng)過人為改造后，可在真核細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)高度靈活且特異的基因組編輯，通過設(shè)計(jì)特異性向?qū)NA(Single guide RNA, sgRNA)序列與靶序列進(jìn)行堿基配對(duì)，從而引導(dǎo)Cas蛋白結(jié)合到靶序列處，行使DNA切割功能，然后利用細(xì)胞的非同源性末端連接(Non-homologous end joining, NHEJ)或同源重組(Homol...

基因編輯產(chǎn)品除了適用基因zhiliao產(chǎn)品的一般考慮以及整合性載體的特殊考慮外，長期隨訪中還應(yīng)額外關(guān)注脫靶風(fēng)險(xiǎn)，量化評(píng)估脫靶活性和在靶活性之間的相關(guān)性，或利用在靶活性來預(yù)測(cè)脫靶活性的水平。在開發(fā)過程中應(yīng)同時(shí)關(guān)注基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率、脫靶效率、插入突變情況、目的基因在靶細(xì)胞中整合位點(diǎn)及表達(dá)。評(píng)估基因zhiliao產(chǎn)品整合進(jìn)基因組的可能性，判斷是否需要開展另外的遺傳毒性研究，評(píng)估插入突變（插入位點(diǎn)、插入拷貝數(shù)等）引起的遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)。需要關(guān)注脫靶編輯、轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座印跡引起的遺傳毒性問題；鑒定/表征基因組整合位點(diǎn)。非臨床研究是藥物開發(fā)的重要環(huán)節(jié)之一。種子基因脫靶檢測(cè)多少錢？江蘇種子脫靶檢測(cè)CROCRISPR/C...

通常不需要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的遺傳毒性組合試驗(yàn)，但應(yīng)根據(jù)基因zhiliao產(chǎn)品的特點(diǎn)、產(chǎn)品的具體適應(yīng)癥、載體的已有信息、導(dǎo)入基因序列結(jié)構(gòu)等，評(píng)估基因zhiliao產(chǎn)品整合進(jìn)基因組的可能性，判斷是否需要開展另外的遺傳毒性研究，如研究基因組修飾的發(fā)生情況，并檢測(cè)隨后可能發(fā)生的異常細(xì)胞行為；評(píng)估插入突變（插入位點(diǎn)、插入拷貝數(shù)等）引起的遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)。當(dāng)基因zhiliao產(chǎn)品采用基因編輯或轉(zhuǎn)座子技術(shù)時(shí)，需要關(guān)注脫靶編輯、轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座印跡引起的遺傳毒性問題；鑒定/表征基因組整合位點(diǎn)。如何檢測(cè)是否發(fā)生脫靶？北京種子基因脫靶檢測(cè)安全性評(píng)價(jià)不同基因zhiliao產(chǎn)品的特殊考慮。關(guān)于整合性載體的特殊考慮如受試者接受整合性載體...

自基因zhiliao出現(xiàn)之日起，安全性問題就隨之產(chǎn)生了，并成為阻礙基因zhiliao研發(fā)的一大障礙，吳寧博士認(rèn)為：“基因zhiliao產(chǎn)品的研發(fā)和上市，安全性會(huì)將是一個(gè)非常重要考量。如果一款產(chǎn)品它安全性有問題的話，在市場(chǎng)化道路上就會(huì)受到很大影響。尤其是基因zhiliao，目前處于起始階段，一旦出現(xiàn)不良事件，很有可能對(duì)整個(gè)行業(yè)都會(huì)產(chǎn)生致命打擊。具體說來，基因zhiliao的安全性問題主要涉及基因插入突變、脫靶、生物分布和持久性、潛伏再jihuo以及潛在免疫原性等。”如何檢測(cè)是否發(fā)生脫靶？廣州種子基因脫靶檢測(cè)安全性評(píng)價(jià)Guide-seq原理圖，Discover-seq細(xì)胞內(nèi)的脫靶切割一般無法直接捕...

近幾年，細(xì)胞和基因zhiliao（cell & gene therapy，CGT）領(lǐng)域發(fā)展迅猛，在多個(gè)方向取得了重大突破，以anti-CD19和BCMA為代的多種CAR-T免疫細(xì)胞療法攻克了一部分血液瘤，多種AAV療法也給一些難以成藥的罕見病提供了有效的zhiliao方案。另一方面，基于CRISPR基因編輯技術(shù)的眾多基因療法也進(jìn)展迅速，較早體外基因編輯療法較快今年年底能夠上市（CRISPR Therapeutics CTX001），體內(nèi)基因編輯療法取得了不錯(cuò)的臨床數(shù)據(jù)（Intellia Therapeutics NTLA-2001），使用CRISPR技術(shù)制造的通用型CAR-T療法也是免疫細(xì)胞療...