將待測DNA經過亞硫酸鹽處理，通過PCR擴增過程引入T7啟動子序列，經T7DNA聚合酶的體外轉錄過程得到各樣本RNA產物，經堿基特異性酶切處理，得到RNA小片段，并用飛行質譜檢測每個片段的分子量，***EpiTYPER程序完成數據的自動化處理并報告每個檢測片段的甲基化程度。技術優勢·檢測片段長：擴增片段長度可達500bp·高靈敏度：可發現低至5%甲基化水平，樣本起始量低至10ng。·重復性好：變異系數CV≤5%。·高性價比：用384孔板進行PCR反應，一個擴增產物可以進行多重CpG位點分析，無需后續驗證，可直接用于文章發表。服務內容1.根據客戶提供的序列信息進行預評估；2.進行樣本DNA的分離、純化、質檢及亞硫酸鹽修飾。3.使用特殊設計的一對引物擴增樣本，得到帶有T7RNA聚合酶啟動子序列的擴增產物。4.在體外轉錄體系中，利用T7RNA聚合酶，將擴增產物轉錄為RN**斷。5.利用RNaseA能夠特異性識別并切割RNA中U3’端的特性，將RN**斷切割成攜帶有CpG位點的小片斷。6.使用sequenom®MassArray飛行質譜分析系統檢測產物。由于同一片斷中，只有CpG和CpA之間16Da的分子量差別，即質譜圖中兩者峰的差距。 人類基因組有約56M的CpG位點，CpG島約3萬個。陜西ATAC技術服務怎么樣

    簡化基因組甲基化測序(ReducedRepresentationBisulfiteSequencing,RRBS)是通過限制性酶切的方法富集基因組DNA上富含CCGG位點的片段，經Bisulfite處理和高通量測序技術進行基因組CpG富集區域內的單堿基分辨率的甲基化測序。相對WGBS而言RRBS技術作為高性價比的甲基化測序方案，測序量大幅減少，在大規模臨床樣本研究中具有很不錯的應用價值。技術優勢從項目背景了解、協助方案設計、實驗材料選取、建庫測序，到數據分析，每個項目有特定的科學問題；需要專業、有價值的建議；科學、縝密的設計；及時高效的溝通；以保障高質量研究成果。信息分析基于簡化基因組范圍的甲基化分析，數據質控，5mCCalling，5mC在基因組、染色體、功能元件上的分布，多樣本甲基化差異聚類，差異甲基化DMR鑒定及相關基因的功能分析，結合項目背景和科學問題的數據亮點挖掘。 北京MeDIP-Seq技術服務專業服務DNA甲基化對基因表達調控起著動態的重要作用。

熒光定量法（Methylight）

這種技術是在MSP技術上發展起來的，在MSP擴增過程中利用熒光染料進行定量。TaqMan? 探針法的應用使得該技術具有更高的精確性。其原理與SNP檢測類似，針對亞硫酸氫鹽處理之后的DN**段，在甲基化位點上會存在單堿基的差異，根據這種差異進行探針設計，隨后進行實時定量PCR，就能夠檢測甲基化的差異。這種方法**的優勢在于其高敏感性和較高通量，且無需在PCR后電泳、雜交等操作，減少了污染和操作誤差。但是TaqMan? 探針訂購費用較高，適用于少數位點大量樣本篩選。

    甲基化DNA免疫沉淀測序（MethylatedDNAImmunoprecipitationSequencing，MeDIP-Seq）是通過5mC特異性抗體富集甲基化的DN**段，然后結合高通量測序技術在全基因組水平上以較小的數據量，快速、高效地尋找甲基化區域。可廣泛應用于甲基化與疾病關系研究。技術優勢全基因組范圍鑒定甲基化修飾區域針對性檢測基因組內具有甲基化修飾的區域與WGBS技術相比，成本更低科學方案設計從項目背景了解、協助方案設計、實驗材料選取、建庫測序，到數據分析每個項目有特定的科學問題；需要專業、有價值的建議；科學、縝密的設計及時高效的溝通；以保障高質量研究成果樣本要求：基因組DNA:>=3ug；樣品濃度>50ng/ul；無RNA和蛋白污染建庫測序：測序策略：IlluminaHiSeq,PE150。 FFPE樣本只需要室溫運輸。

聯合亞硫酸氫鈉的限制性內切酶分析法（COBRA）

這種方法是將亞硫酸氫鹽處理與酶切相結合來進行甲基化檢測。DNA樣本經亞硫酸氫鹽處理后，利用PCR擴增。擴增產物純化后用限制性內切酶（BstUI）消化。若其識別序列中的C發生完全甲基化(5mCG5mCG)，則 PCR擴增后保留為CGCG，BstU I能夠識別并進行切割；若待測序列中，C未發生甲基化，則PCR后轉變為TGTG，BstUI識別位點丟失，不能進行切割。這樣酶切產物再經電泳分離、探針雜交、掃描定量后即可計算出原樣本中甲基化的比例。

這種方法**的優點就是相對簡單，可進行快速定量，且需要的樣本量少。然而，它的局限性也十分明顯，只能獲得特殊酶切位點的甲基化情況，且陰性結果并不能排除樣品DNA中存在甲基化的可能。 通過甲基化數據與耐藥基因Panel數據聯合分析。850K芯片技術服務方案

cfDNA，cell free DNA，就是血液中游離的自身DNA。陜西ATAC技術服務怎么樣

    全基因組甲基化測序（WholeGenomeBisulfiteSequencing,WGBS）是將重亞硫酸鹽Bisulfite處理和高通量測序技術相結合，對有參考基因組進行全基因組范圍的單堿基分辨率的甲基化測序，是DNA甲基化檢測的“金標準”。WGBS滿足全基因組DNA甲基化圖譜及疾病關聯分析、基因調控分析、疾病的甲基化標志物篩選等探索性課題的研究。技術優勢DNA甲基化檢測**有力的工具單堿基分辨率，檢測每個C堿基的甲基化狀態全基因組范圍，**限度地獲得甲基化信息適合所有有參考基因組的物種適合各種類型的樣本樣本要求：基因組DNA:>=3ug；樣品濃度>30ng/ul；無RNA和蛋白污染建庫測序：測序策略：IlluminaHiSeq,PE150；測序深度：>=30X信息分析基于全基因組范圍的甲基化分析，數據質控，5mCCalling，5mC在基因組、染色體、功能元件上的分布，多樣本甲基化差異聚類，差異甲基化DMR鑒定及相關基因的功能分析，結合項目背景和科學問題的數據亮點挖掘。 陜西ATAC技術服務怎么樣