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③待分離膠完全聚合后,傾去其頂部的去離子水,用濾紙將水吸干。④配制4%濃縮膠5mL,加TEMED5μL、10%APS50μL,混勻立即灌膠,灌至頂部,并垂直插入Teflon齒梳,室溫靜置20min待膠聚合。⑤待膠完全聚合后拔出梳子,將凝膠置于電泳槽中,加入電泳緩沖液,用電泳緩沖液沖洗上時間就是金錢,效率就是生命唯有惜時才能成功,唯有努力方可成就樣孔以去除氣泡。2電泳①取各個處理組蛋白提取液,調整蛋白濃度為6μg/μL,和等體積2上樣緩沖液混合,即為上樣液。②將上樣液于100℃沸水中煮沸5min,使蛋白變性,冰上驟冷,3000轉/min離心1min。③每孔加上樣液15μL,留一孔加10μL預染的Marker。加滿電泳緩沖液,蓋上槽蓋,接通電源,先用80v恒壓電泳,約20min,當指示劑溴酚藍進入分離膠后改用110v恒壓電泳,當指示劑到達距凝膠下端約處時關閉電源,取出膠板。3轉印蛋白及免疫檢測①在電泳即將結束前,預先將PVDF膜浸泡在甲醇中15s,然后用ddH2O漂洗2min,浸泡于轉移緩沖液中5min后開始后續操作。②在水中撬膠,修膠后將膠浸泡于轉移緩沖液中平衡15min。③按黑面(負極)→海綿→濾紙→膠→PVDF膜→濾紙→海綿→紅面(正極)的順序制備轉膜“三明治”。自貢生物試劑第三方檢測中心成都瑞普信生物技術有限公司第三方檢測ELISA實驗。
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