常用培養基的制備及注意事項一、實驗目的了解培養基的配制原理;掌握配制培養基的一般方法和步驟;了解常見滅菌、清毒基本原理及方法;掌握干熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過濾除菌的操作方法。二、實驗原理培養基是人工按一定比例配制的供微生物生長繁殖和合成代謝產物所需要的營養物質的混合物。培養基的原材料可分為碳源、氮源、無機鹽、生長因素和水。根據微生物的種類和實驗目的不同,培養基也有不同的種類和配制方法。牛肉膏蛋白胨培養基是一種應用較普遍和較普通的細菌基礎培養基,有時又稱為普通培養基。由于這種培養基中含有一般細胞生長繁殖所需要的較基本的營養物質,所以可供微生物生長繁殖之用。干熱天菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質變性從而達到殺死微生物的效果。高溫下長時間停留會導致瓊脂過度凝固、糖類焦化或蛋白質變性。全自動培養基制備器多少錢
溶化:培養基放入燒杯或瓷缸中,慢慢加入少量所需水,邊加入邊用玻璃棒攪拌。如果培養基中不含有瓊脂,培養基不需要加熱;如果含有瓊脂,則需要用本生燈或電磁爐加熱煮沸,完全溶解后,再補齊所需水,并攪拌均勻。如果配置的培養基量很大,可用不銹鋼鍋加熱溶化,可先用溫水加熱并隨時攪動,防止焦化,如有焦化現象,配制的培養基就不能使用,要重新配制。配制培養基時不可用銅或鐵的容器溶化,因銅或鐵制容器可能會使培養基中的銅和鐵的含量超標,影響實驗(培養基中銅含量大于0.3mg/L,細菌不宜生長,鐵含量超過0.14mg/L,妨礙細菌產有害)。對容易發生反應,產生沉淀的藥品,要分開溶解,較后加入培養基,如磷酸二氫鉀和硫酸鎂。云南培養基制備器廠家培養基制備器負載的壓力,有效地避免了培養基過溫失效和培養基中氣泡的產生。
消毒與滅菌的區別:消毒指使用較為溫和的物理或化學方法單殺死物體表面或內部一部分對人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。消毒方法常用煮沸消毒法,巴氏消毒法(對于一些不耐高溫的液體)還有化學藥劑(如酒精、氯氣、石炭酸等)消毒、紫外線消毒。滅菌則是指使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物,包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。滅菌方法:①接種環、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法;②玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法,所用器械是干熱滅菌箱;③培養基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法,所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。④表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法,所用器械是紫外燈。
牛肉膏蛋白胨液體培養基(又稱營養肉湯,用于培養細菌):成分:牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g,蒸餾水(或去離子水)1000mL,pH7.4士0.2。制法:將各成分溶解于水中,于20~25℃條件下以1mol/LNaOH溶液用pH計校正pH7.4,分裝三角瓶(裝量以三角瓶容積的1/2~2/3為宜),或試管(分裝量以試管高度的1/4左右為宜),0.1MPa滅菌15~20min后備用?;瘜W分類:天然培養基指一類利用動、植物或微生物體包括其提取物制成的培養基。如牛肉膏蛋白胨培養基、麥芽汁培養基等。組合培養基又稱為合成培養基或綜合培養基,是一類按微生物的營養要求精確設計后用多種高純化學試劑配制成的培養基。如葡萄糖銨鹽培養基、淀粉硝酸鹽培養基等。半組合培養基指一類主要以化學試劑配制,同時還加有某種或某些天然成分的培養基。例如,馬鈴薯蔗糖培養基。**蒸汽加熱**(高壓滅菌鍋):需關注蒸汽生成速度及均勻性。
培養基配制--容器和水:配制培養基所用的容器不得影響培養基質量,一般為玻璃容器,培養基配制所用的容器和配套器具應潔凈,可用純化水沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來物質殘留。在大體積配制培養基時,企業也可根據自己的情況采用不銹鋼容器,建議專鍋,且容器應潔凈。不建議使用陶瓷或搪瓷容器。培養基用水是培養基制備過程中非常重要的一個物質。不可以使用自來水,自來水中的雜質可能會對檢驗結果有一定的影響。許多法規在培養基配方中采用蒸餾水作為配制用水,實際上純化水的潔凈程度不差于蒸餾水,甚至更優,所以不必單獨制備蒸餾水,直接使用純化水即可,配制用純化水應按藥典的要求定期進行檢測。攪拌轉速異常需檢查電機碳刷磨損情況。云南培養基制備器廠家
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培養基是生物制品領域中常用的物質,在細菌和細胞培養中十分必要,但是現有技術中有些培養基的某種組份容易分解,造成保存時間短等問題,導致培養基的使用成本十分高。其中,在動物培養基中,谷氨酰胺是一種必要的組份,但是在常溫下,很短的時間內,約7-10日中培養基中的谷氨酰胺成份就可降解90%以上,這給其商品化帶來很大的困難。這樣的培養基在現有技術中很多,都具有上述的缺陷,例如,中國CN1087778C公開了一種雜交瘤細胞的無血清培養基,其中包含有谷氨酰胺成份,但是這種培養基的保存時間十分有限,很難達到商業使用的目的。全自動培養基制備器多少錢