在定量PCR時，我們常常糾結一個問題，究竟是相對定量還是***定量呢？如今，你無需糾結了，因為數字PCR（digitalPCR）來了。盡管這兩種技術有些類似，都是估計起始樣品中的核酸量，但它們有一個重要的區別。定量PCR是依靠標準曲線或參照基因來測定核酸量，而數字PCR則讓你能夠直接數出DNA分子的個數，是對起始樣品的***定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應用領域：拷貝數變異、突變檢測、基因相對表達研究（如等位基因不平衡表達）、二代測序結果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等。數字PCR是定量技術，基于單分子PCR方法來進行計數的核酸定量，是一種定量的方法。美國微滴式數字PCR分析應用

數字PCR技術的出現不是為了完全取代原有分子診斷技術，而是更好的補充和完善現有技術平臺。數字PCR為不同應用場景下的多樣化核酸檢測需求提供了新的思路，尤其是在臨床檢測方面。國產數字PCR企業在商業化應用方面，也不斷“攻城略地”。數字PCR作為當下靈敏的核酸檢測技術，盡管目前國產數字PCR企業異軍突起，在臨床市場中實現了彎道超車，但未來仍然需要聚焦客戶需求，不斷夯實底層創新，同時在檢測成本、自動化、試劑盒申報注冊、出海國際化等方面不斷努力，提供更為的解決方案。國際局勢，波譎云詭。在百年未有之大變局，實現中華民族的偉大復興，需要國內企業瞄準技術高地，以爭分奪秒的精神，解決技術"卡脖子"的難題，不斷攻堅克難，自主創新，在與國際品牌的同臺競技中，彰顯中國實力。上海雙螺旋生物儀器數字PCR試劑盒臻準推出新款數字PCR產品：AccuONE2.0數字PCR系統。

產物越短，往往擴增效率越高。模板二級結構（Templatesecondarystructure）：PCR變性中和變性后的單鏈DNA不夠穩定，容易自發折疊形成二級結構。應避免可形成穩定二級結構的模板鏈區域，因為如果模板鏈形成的二級結構在退火溫度下穩定存在，定位在模板鏈二級結構處的引物將無法同模板鏈相結合。使用mfold可預測引物待結合的區域是否存在復雜的二級結構。設計引物時，盡量使引物定位在模板二級結構以外的序列上。避免具有4個以上相同的連續堿基的區域（Avoid>4repeatsofsamebases）：以避免延伸階段聚合酶“滑動（PolymeraseSlippage）”。選擇GC含量（GCContent）在50-60%之間的區域。如果高GC含量區域不可避免，可以嘗試提高退火溫度，并使用添加劑，例如甘油，

相比于qPCR，dPCR在轉基因檢測中具有以下優勢：（1）檢測靈敏度高：理論上dPCR的靈敏度可達1個拷貝，而實際應用中dPCR的小檢出限和比較低定量限數值非常接近，所以dPCR可以在非常低的目標拷貝數下得到精確的結果；通常轉基因比參考基因（內源基因）濃度低很多；（2）前處理簡單且受基質成分干擾較小：dPCR反應效率和精密度受到食品基質成分干擾影響較小，可應用于混合基質樣品中低豐度DNA的檢測；（3）dPCR對抑制劑的敏感性較低：由于dPCR結果表示為“有熒光“或“無熒光”，即使存在抑制劑降低了熒光強度仍可以表示為“有熒光；（4）適合多重轉基因檢測：食品或飼料提取的DNA中可能包含多種轉基因片段，可以進行多重dPCR檢測，提高分析效率。同時，dPCR可以直接溯源至SI國際單位制摩爾，適合單一、雙重及多重轉基因標準物質研究，一次可識別不同的轉基因區域。下面詳細進行說明。PCR本質上是將一個傳統的PCR反應分成了數萬個PCR反應。

數字聚合酶鏈式反應（digitalpolymerchainreaction，dPCR）技術因具有高靈敏度、受基質干擾少等優勢而被廣用于轉基因食品檢測。本研究綜述了數字PCR技術的原理、系統各部件的優劣勢，梳理了數字PCR技術在轉基因檢測與溯源技術（標準物質）方面的進展和發展趨勢，以期為轉基因食品檢測領域提供參考依據。dPCR的擴增過程大致上可以分為3步：樣品的分散、樣品的熱循環擴增和樣品的檢測。對于數字PCR儀器系統，各個部件之間仍然有較大的改進空間，要發揮部件之間的協同作用是很重要的，而且有持續研究的價值。表1中總結了部分常見的數字PCR系統的類型，以及相對在硬件、便攜性、性價比和自動化程度上的比較。在數字PCR賽道，塔歌生物將加速胎兒染色體非整倍體無創產前篩查注冊證的申報。上海雙螺旋生物儀器數字PCR試劑盒

數字PCR適用于依靠Ct值不能很好分辨的應用領域。美國微滴式數字PCR分析應用

在熒光定量PCR應用已經如此的情況下，緣何數字PCR仍然能橫空出世？中心點在于熒光定量PCR盡管為科研和臨床市場應用提供了非常重要的檢測工具支撐，但仍然有尚未被滿足的客戶需求。熒光定量PCR需要基于標準品制作的標準曲線進行定量，屬于相對定量，操作較為復雜，且終端用戶對其結果的重復性、靈敏性、精密度、分辨率、對PCR反應抑制劑的耐受性等方面有更高的期待。數字PCR通過將反應體系進行有限稀釋至成千上萬的反應單元中，實現了核酸靶標的單分子擴增。PCR擴增結束后，基于終點法對陽性液滴數和總液滴數進行計數，結合泊松分布原理，從而實現對起始樣本的定量。其極大地簡化了操作步驟，并且大幅提高了檢測性能，尤其在低豐度或較低豐度的核酸檢測上（靈敏性可達0.001-0.0001%），其優異的性能得到了終端用戶的認可。美國微滴式數字PCR分析應用

雙螺旋科學儀器，2015-04-17正式啟動，成立了數字PCR，純水機，病理切片機，倍性分析儀等幾大市場布局，應對行業變化，順應市場趨勢發展，在創新中尋求突破，進而提升臻準,美國艾科浦,銳訊生物,Sysmex,Eprerdia的市場競爭力，把握市場機遇，推動精細化學品產業的進步。業務涵蓋了數字PCR，純水機，病理切片機，倍性分析儀等諸多領域，尤其數字PCR，純水機，病理切片機，倍性分析儀中具有強勁優勢，完成了一大批具特色和時代特征的精細化學品項目；同時在設計原創、科技創新、標準規范等方面推動行業發展。我們在發展業務的同時，進一步推動了品牌價值完善。隨著業務能力的增長，以及品牌價值的提升，也逐漸形成精細化學品綜合一體化能力。公司坐落于廣州市黃埔區銳豐三街4號617房，業務覆蓋于全國多個省市和地區。持續多年業務創收，進一步為當地經濟、社會協調發展做出了貢獻。