在PCR進行的過程中，首先是引物和探針分別結合，然后開始擴增。如果一個微滴當中有目標基因的片段，Taqman探針就會被酶切碎，熒光基團和淬滅基團分離。在后面的檢測過程中，熒光基團被激發光路激發之后就會發熒光。如果沒有，Taqman探針就不會被切碎，在后面的檢測過程中，熒光基團吸收到激發光的能量，就會被淬滅基團給淬滅，那么儀器就檢測不到這個微滴的信號。檢測的過程中，并不是說一個樣本中檢測到了幾個亮點，這個反應當中就有幾個目標基因的拷貝。因為目標基因的片段，在微滴當中的分布，是符合泊松分布的（也就是說進不進的概率相等，并且相互獨立）。所以，一個發光的微滴中，可能有一個或者三個四個，甚至更多個目標基因的拷貝。因此，發光的微滴數與原始的基因拷貝數并不是一對一的對應關系。我國數字PCR市場的整體規模、公司影響力、行業話語權等也將迎來進一步提升，從而助推行業高質量創新發展。蘇州進口數字PCR分析應用

數字PCR系統的分散方式決定了分散數量，其結果基于統計的方法進行定量，增加反應單元數量（統計樣本量），可以增加其檢測的容量和動態檢測線性范圍達到和qPCR相近的動態范圍，同時減小一個反應單元中包含多個分子所造成的誤差，達到提高靈敏度和準確度。影響dPCR定量結果的因素包括：儀器采用的分散方式與數量、溶液稀釋方法、分散體積的準確性以及結果表達方式。分散方式與數量由數字PCR系統決定，分散體積和結果表達方式需要實驗人員在實驗過程中優化得到。德國微滴式數字PCR儀器數字PCR即Digital PCR（dPCR)，它是一種核酸分子定量技術。

Drop-off實驗包括兩個針對相同擴增子的TaqMan探針：與野生型序列互補而與突變位點不發生互補的Drop-off探針和與突變型和野生型基因都互補的Reference探針（如圖1A）。在野生型等位基因的存在下，Drop-off探針和Reference探針都將與目標雜交，產生雙重陽性信號（如圖1B，藍色群）。相反，如果存在突變的等位基因，即使一個核苷酸的突變也會阻止Drop-off探針與之雜交，因此只有Reference探針對目標基因進行退火，從而得到一個陽性信號。

數字PCR是一種核酸分子定量技術。當前核酸分子的定量有三種方法，光度法基于核酸分子的吸光度來定量；實時熒光定量PCR（RealTimePCR）基于Ct值，Ct值就是指可以檢測到熒光值對應的循環數；數字PCR是的定量技術，基于單分子PCR方法來進行計數的核酸定量，是一種定量的方法。主要采用當前分析化學熱門研究領域的微流控或微滴化方法，將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應器或微滴中，每個反應器的核酸模板數少于或者等于1個。這樣經過PCR循環之后，有一個核酸分子模板的反應器就會給出熒光信號，沒有模板的反應器就沒有熒光信號。根據相對比例和反應器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度。數字PCR的應用甚廣，除了可應用于進行突變的檢測以外，也可運用于基因擴增的檢測。

對于檢測需要高靈敏度以及技術確認的情況下，數字PCR技術也可以發揮重要作用。技術數據表明，數字PCR技術對的比較低檢測下限可到2copies/ml，比qPCR靈敏度提升了100倍。經測試，數字PCR在檢測和診斷的某些方面優于金標準qPCR，尤其是在低病毒載量樣本中，相比起qPCR，數字PCR特異性、靈敏度、重現性和檢測限受影響更小。因此，未來預計數字PCR技術也將在類疾病中得到更加廣的應用。數字PCR的應用甚廣，除了可應用于進行突變的檢測以外，也可運用于基因擴增的檢測。通過數字PCR技術可建立多重熒光體系，用于同時檢測比如非小細胞肺中常見的MET和HER2耐藥擴增。有研究報道，使用數字PCR技術對436例非小細胞肺樣品進行檢測，并挑選樣本驗證了數字PCR與RNA fish的檢測一致性。結果表明，該數字PCR技術在保證了基因擴增檢測準確性的同時，還節約了檢測時間。Drop-off數字PCR檢測方法的**主要優勢是能夠能夠在一個反應中檢測到基因組序列范圍短的同源基因突變。德國臻準數字PCR解決方案

無創產前篩查有望成為數字PCR在臨床快速落地的應用。蘇州進口數字PCR分析應用

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