免疫沉淀技術經過不斷發展,衍生出了多種不同類型以滿足不同的研究需求。個別免疫沉淀法(IP),主要用于從細胞萃取物中分離已知的特定蛋白質。比如在研究某個已知功能蛋白在細胞內的表達量變化時,就可以使用這種方法將該蛋白分離出來進行分析。免疫共沉淀法(Co - IP),著重研究整個蛋白質復合體,通過使用針對不同蛋白質的抗體,能夠揭示蛋白質復合體的組成成分,是研究信號傳導和細胞調控網絡的有力工具。例如在研究細胞內某一信號通路中,多個蛋白之間是否存在相互作用并形成復合體時,Co - IP 就發揮著關鍵作用。染色質免疫共沉淀法(ChIP),聚焦于研究 DNA 上的特定蛋白質,常用于探究蛋白質與 DNA 的相互作用,尤其是轉錄因子或組蛋白修飾與特定基因啟動子區域的結合情況,結合 DNA 測序(ChIP - Seq)技術,極大地推動了表觀遺傳學和轉錄調控領域的研究進展。RNA 免疫沉淀法(RIP),與 ChIP 類似,但主要研究對象是會與 RNA 結合的蛋白質,有助于理解 RNA 加工、運輸、穩定性以及 RNA 介導的基因調控機制,在研究 RNA 結合蛋白與目標 RNA 的結合時發揮重要作用。植物學研究用免疫沉淀探究植物蛋白功能,助力培育更優農作物品種,保障糧食安全。溫州ChIP免疫沉淀磁珠貨期
當細胞被裂解后,這些蛋白質復合物在一定條件下仍能保持相對穩定。我們向裂解液中加入針對某個已知蛋白(通常稱為誘餌蛋白)的特異性抗體,抗體與誘餌蛋白特異性結合形成抗原 - 抗體復合物。借助 Protein A/G 磁珠或瓊脂糖珠這類固相載體,其表面的 Protein A 或 Protein G 能夠與抗體的 Fc 段緊密相連,通過離心或磁力分離,將抗原 - 抗體復合物連同與之相互作用的其他蛋白質(獵物蛋白)一同從裂解液中沉淀出來,從而實現對蛋白質復合物的富集和分析,揭示蛋白質之間的相互作用關系。南京anti Flag免疫沉淀磁珠原理病毒研究中,免疫沉淀可分離病毒抗原,為病毒檢測技術與抗病毒藥物研發打基礎。
首先是樣品制備,對于細胞樣品,需要選擇合適的細胞培養條件,確保細胞處于正常生理狀態。收集細胞后,使用特定的裂解液進行裂解,裂解液的成分需精心調配,既要保證細胞充分破碎,釋放出細胞內的蛋白質,又要避免破壞蛋白質的結構與活性。裂解過程通常在低溫環境下進行,以減少蛋白酶對蛋白質的降解。細胞裂解完成后,將裂解液與特異性抗體混合,在適宜的溫度和時間條件下孵育,促進抗體與目標蛋白的結合。一般來說,4℃孵育可以降低非特異性結合,提高實驗的特異性。
在生命科學研究的微觀世界里,探索生物分子之間的相互作用關系猶如在錯綜復雜的迷宮中尋找線索。免疫沉淀技術,作為一種強大的研究手段,如同為科研人員點亮了一盞明燈,幫助他們深入剖析生物分子的奧秘。免疫沉淀的原理基于抗原與抗體之間高度特異性的結合反應。抗體是免疫系統產生的一種特殊蛋白質,它能夠精細識別并緊密結合特定的抗原分子。在實驗操作中,首先將針對目標抗原的特異性抗體與細胞裂解液或其他生物樣品混合。細胞裂解液中包含了眾多的生物分子,其中目標抗原會與抗體發生特異性結合,形成抗原-抗體復合物。隨后,向混合體系中加入能夠與抗體結合的固相載體,例如ProteinA或ProteinG偶聯的瓊脂糖珠或磁珠。免疫沉淀的關鍵在于選擇合適的抗體,確保其與目標蛋白的高親和力和特異性。
比如在開發抗病毒藥物時,利用免疫沉淀技術研究病毒蛋白與宿主細胞蛋白的相互作用,有助于發現新的藥物靶點,為開發更有效的抗病毒藥物提供理論依據。在農業科學中,免疫沉淀技術可用于研究植物與病原體之間的相互作用。通過分析植物在病原體后,細胞內蛋白質相互作用網絡的變化,有助于培育具有更強抗病性的作物品種。盡管免疫沉淀技術已相當成熟,但科研人員仍在不斷改進和創新。未來,隨著微流控技術、超高分辨率質譜技術等新興技術與免疫沉淀技術的融合,我們有望在單細胞乃至單分子水平上,更精細地解析生物分子的相互作用,為攻克疑難疾病、推動生物產業發展提供更強大的技術支持。免疫沉淀技術將持續助力生命科學的探索,為人類認識生命本質、改善生活質量帶來更多突破。免疫沉淀搭配其他技術,如 western blot,可對目標蛋白定性定量,豐富研究維度。深圳Co IP免疫沉淀磁珠原理
免疫沉淀操作涵蓋抗體孵育、復合物沉淀、多次清洗等一系列嚴謹步驟。溫州ChIP免疫沉淀磁珠貨期
在實驗體系中,當向含有目標蛋白的生物樣品(如細胞裂解液、組織勻漿等)加入特異性抗體后,抗體迅速與目標蛋白相互作用,形成抗原 - 抗體復合物。為了從復雜的樣品中分離出這一復合物,通常會引入固相載體,如 Protein A/G 磁珠或瓊脂糖珠。這些珠子表面的 Protein A 或 Protein G 能與抗體的 Fc 段特異性結合,通過離心或磁力分離等操作,就可以將抗原 - 抗體復合物從樣品中沉淀出來,從而實現對目標蛋白的富集與純化 。IP 免疫沉淀的實驗流程包含多個關鍵步驟。溫州ChIP免疫沉淀磁珠貨期