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廣東高通量轉錄組學技術

來源: 發布時間:2021-12-26

RNA-seq轉錄組學:也被稱為整個轉錄組鳥測序(wts)。RNA-seq包含三個步驟:測序文庫的建立,在特定平臺中測序和生物信息學分析。RNA-Seq是一種基于NGS技術的新的轉錄分析方法。采用NGS技術對從感興趣的RNA樣本序列反轉錄得到的cDNA進行測序。簡而言之,就是對剪切變體、轉錄后RNA編輯、內含子表達水平和特定等位基因的表達情況進行定性和定量分析。RNA-Seq原理:在對基因組測序和分析研究的同時,復雜的轉錄組研究也普遍發展起來。利用高通量測序技術平臺分析轉錄組的結構和表達水平情況,更能挖掘未知轉錄本和稀有轉錄本信息,精確地識別RNA的選擇性剪切以及編碼序列的單核苷酸多態性(SPN),進一步解析復雜的轉錄組信息。轉錄組學可以直接測定每個轉錄本單核苷酸分辨率的準確度。廣東高通量轉錄組學技術

RNA-Seq轉錄組學的應用:RNA-Seq即對轉錄組進行測序和分析。一般來說在研究所會委托公司測序得到數據自己進行后續的生信分析(質控,mapping,差異基因表達分析,SNV分析等)。RNA-Seq有著巨大的應用前景。在不同背景下比較mRNA水平同一物種,不同組織:研究基因在不同部分的表達情況。同一物種,同一組織:研究基因在不同處理下,不同條件下的表達變化。同一組織,不同物種:研究基因的進化關系。時間序列實驗:基因在不同時期的表達情況與發育的關系。基因分類:找到細胞特異,疾病相關,處理相關的基因表達模式,用于診斷疾病和預測等。基因網絡和通路:基因在細胞活動中的功能,基因間的相互作用。廣東高通量轉錄組學技術相對于傳統的芯片雜交平臺,轉錄學組測序無需預先針對已知序列設計探針。

轉錄組學測序流程:1、樣品RNA準備。2、測序文庫構建。3、DNA成簇(Cluster)擴增。4、高通量測序(Illumina)。5、數據分析。轉錄組的分析大致有以下幾種情況:1、同一物種在發育過程中的各時間節點的基因表達特點及存在的差異;2、不同品系之間存在的差異表達基因;3、不同的外界條件處理,如細菌、病毒、光照、紫外、干旱、高溫、高鹽脅迫,對基因表達的影響;4、同一個體,不同組織之間的基因表達差異。簡而言之,轉錄組學是從RNA水平研究基因表達的情況。

轉錄組學(Transcriptome)廣義上指某一生理條件下,細胞內所有轉錄產物的匯合,包括信使RNA(mRNA)、核糖體RNA(rRNA)、轉運RNA(tRNA)及非編碼RNA(ncRNA);狹義上指所有mRNA的匯合。轉錄組具有很強的時間和空間特性,是基因功能及結構研究的基礎和出發點,掌握了生物個體基因轉錄水平的變化,可深入了解其生命活動特征和調控機制。通過新一代高通量測序,能夠全方面快速地獲得某一物種特定組織在某一狀態下的幾乎所有轉錄本的基因序列信息。轉錄組學是一門在整體水平上研究細胞中基因轉錄的情況及轉錄調控規律的學科。

RNA-Seq,是基于新一代測序技術的轉錄組學研究方法:首先提取生物樣品的全部轉錄的RNA并進行mRNA富集,然后反轉錄為cDNA后進行的新一代高通量測序,在此基礎上進行片段的拼接組裝,從而可得到一個個的轉錄本,進而可以形成對該生物樣品當前發育狀態的基因表達狀況的全局了解。不同階段或部位的生物樣品的RNA-Seq轉錄組進行比較分析,則可以在轉錄層面得到基因表達水平的變化,針對關鍵基因則可以進行代謝通路(Pathway)的構建。轉錄組學即特定細胞在某一功能狀態下轉錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。轉錄組學檢測范圍廣,高于6個數量級的動態檢測范圍。山東SmalIRNA轉錄組學方法

轉錄學組測序能夠提供更準確的數字化信號。廣東高通量轉錄組學技術

轉錄組學技術路線及研究意義:轉錄組測序的研究對象為特定細胞在某一功能狀態下所能轉錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。相對于傳統的芯片雜交平臺,轉錄組測序無需預先針對已知序列設計探針,即可對任意物種的整體轉錄活動進行檢測,提供更準確的數字化信號,更高的檢測通量以及更普遍的檢測范圍,是目前深入研究轉錄組復雜性的強大工具。基于高通量測序平臺的轉錄組測序技術能夠全方面獲得物種特定組織的轉錄本信息,從而進行基因表達水平研究、新轉錄本發現研究、轉錄本結構變異研究等。廣東高通量轉錄組學技術

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