激光掃描共聚焦顯微鏡(confocallaserscanningmi-croscopy,CLSM)是一種新型高精度的激光源加共聚焦顯微鏡,是利用激光作為光源,在傳統光學顯微鏡基礎上采用共軛聚焦原理和裝置,并利用計算機對所觀察分析對象進行數字圖像處理的一套觀察和分析系統其比較大特點是對標本進行無損傷性的實時觀察分析,得到細胞或結構內部微細結構的熒光圖像,以及在亞細胞水平上觀察諸如Ca2+、pH值、膜電位等生理信號以及細胞形態的變化,對生物標本進行定性、定量、定時和定位研究,具有極大的優越性[1]。主要構件一個完整的CLSM系統由幾個主要的硬件和一些成像分析軟件組成。硬件包括表面熒光顯微鏡、激光光源及冷卻系統、定位掃描裝置、分辨系統、計算機控制系統、顯示器和圖像輸出打印設備。 雙光子顯微鏡使用時,需要注意哪些問題呢?甘肅官方顯微鏡貨源推薦
激光共聚焦顯微鏡利用激光束經照明形成點光源對標本內焦平面
上的每一點掃描 標本上的被照射點發射的熒光在探測處成像
而來自該點以外的任何發射熒光均被探測阻擋 由探測后的
光電倍增管逐點接受 在計算機監視器屏幕上形成熒光圖像。所以照
明與探測相對于物鏡焦平面是共軛的 也就是說照明與
探測具有共同的焦平面。在載物臺上加一個微量步進馬達 使載
物臺沿垂直方向(Z 軸) 上下步進移動 將樣品新的一個層面移到焦平
面上 這個層面又成像在顯示器上 隨著Z 軸的不斷移動 就可得到
樣品不同層面連續的光學圖像 實現“光學切片” 的目的, 被形象地
稱為“顯微CT”, 在此基礎上計算機系統自動進行三維重建。 吉林光學顯微鏡使用雙光子顯微鏡時要注意些什么呢?
超分辨率熒光顯微成像作為一類很新的技術,突破了光學成像中的衍射極限,把傳統成像分辨率提高了10~20倍,達到了幾十納米,把我們從顯“微”鏡時代帶入到顯“納”鏡時代。對生物學家而言,好比一個近視眼的人突然戴上了合適的眼鏡,從而可以用前所未有的視角觀察奇妙的生物微觀世界,揭示前所未見的生物微觀結構和現象。這些超分辨技術在過去的七八年間不斷進步,同時也已經在生物學研究中應用,包括細胞膜蛋白分布、細胞骨架、線粒體、染色質、神經元突觸以及原核生物的研究等。超分辨率技術一出現就引起關注,先是在2006年被世界期刊Science評為年度**技術突破,接著被生物醫學方法學比較好的期刊NatureMethods評為2008年年度方法。在2014年10月的NatureMethods10周年特刊評出的10年**技術中,超分辨率熒光顯微成像和單分子技術都出現在榜中,并幾乎在同時獲得2014年諾貝爾化學獎。
SPM(Scanning Probe Microscope) 是掃描隧道顯微鏡
STM及原子力顯微鏡AFM, 激光力顯微鏡LFM, 磁力
顯微鏡MFM等的統稱, 國際上近年發展起來的表面分析
儀器。
控制探針在被檢測樣品的表面進行掃描, 同時記錄下
掃描過程中探針前列和樣品表面的相互作用, 就能得到
樣品表面的相關信息。
利用這種方法得到被測樣品表面信息的分辨率取決于
控制掃描的定位精度和探針作用前列的大小(即探針的
尖銳度) 。
原子級**辨率 ;
實空間中表面的三維圖像 ;
觀察單個原子層的局部表面結構 ;
可在真空、 大氣、 常溫等不同環境下工作;
可以得到有關表面結構的信息, 例如表面不同
層次的態密度、 表面電子阱、 電荷密度波、 表
面勢壘的變化和能隙結構等 。
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實際上,衍射極限是一種遠場(far-field)效應,在近場(near-field)條件下無效。因此早期的一些嘗試突破光學衍射極限的努力都是基于近場光學成像的。像這次諾貝爾獎得主EricBetzig就早在1993年發展了掃描近場光學顯微鏡,實現了室溫下的單分子超分辨率成像。然而,近場光學顯微鏡無法用于細胞內部的成像,因此在生物領域的應用一直沒有發展起來。后期的各種“突破”光學衍射極限的努力都是在遠場條件下發展起來的。超分辨率顯微成像一般指在遠場條件下基于熒光的、“突破”衍射極限的光學顯微成像技術。熒光是物質吸收光照后發出的一類光。物質分子中的電子分布在不同的能級上。當一束光打到分子,分子具有一定的概率吸收光子,同時其處在基態的電子會躍遷到更高能量的激發態能級。處在激發態的電子有多種途徑回到基態,其中一條途徑就是發出一個光子(熒光),釋放能量回到基態。 激光掃描共聚焦顯微鏡維修保養。廣東雙光子顯微鏡推薦貨源
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STM所具有的獨特優點
(l) 具有原子級的**辨率。 STM在平行和
垂直樣品表面方向的分辨率分別可達0.1nm
和0.01nm, 即可以分辨出單個原子。
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(2) 可實時地得到在實空間中表面的準三維
圖象, 可用于具有周期性或不具備周期性的
表面結構研究。
(3) 可以觀察單個原子層的局部表面結構,
而不是體相或整個表面的平均性質。
4) 可在真空、 大氣、 常溫等不同環境下工作,
甚至可將樣品浸在水和其它溶液中, 不需要特別
的制樣技術, 且探測過程對樣品無損傷。
( 5) 配合掃描隧道譜 STS( Scanning Tunneling
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( 5) 配合掃描隧道譜 STS( Scanning Tunneling
Spectroscopy) 可以得到有關表面電子結構的信息,
例如表面不同層次的態密度、 表面電子阱、 電荷
密度波、 表面勢壘的變化和能隙結構等。
(6) 在納米鑷子幫助下可實現原子的操縱和加工,
所以被認為開始了納米科技的新時代。
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