一、透射電鏡樣品超薄切片常規制作規程
1
．取材：根據實驗目的取材，要求部位準確，體積小于
2mm3
2
．醛類固定：用
2%-3%
的戊二醛固定
2
小時；
3
．清洗：用磷酸緩沖液清洗
3
次，每次
10min
；
4
．鋨酸固定：用
1%-2%
的鋨酸固定
2~3
小時；
5
．清洗：用磷酸緩沖液清洗
3
次，每次
10 min
；
6
．脫水：用
50%
、
70%
、
80%
、
90%
乙醇梯度脫水各
15min
，再用
100%
乙醇脫水
3
次，每次
30min
；
7
．置換：用環氧丙烷或丙酮置換
3
次，每次
30min;
8.
浸漬：
10hr
以上，浸漬過程如下：
①丙酮：包埋劑
=3
：
1
的浸漬液浸漬（動物樣品
1hr
，植物樣品
2~3hr
）
；
②丙酮：包埋劑
=1
：
1
的浸漬液浸漬（動物樣品
1hr
，植物樣品
2~3hr
）
；
③丙酮：包埋劑
=1
：
3
的浸漬液浸漬（動物樣品
4hr
，植物樣品
12~24hr
）
；
④純包埋劑浸漬（動物樣品
4hr
，植物樣品
12~24hr
）
；
9
．包埋：將樣品放入盛有純包埋劑的包埋板中；
包埋劑配方中
Epon812
，
MNA
，
DDSA
，
DMP-30
的比例見附表
10
．
聚合：將包埋板置于
40C
、
60
℃條件下各聚合
48hr
；
11
．修塊：將包埋頭修成梯形，且樣品表面積小于
0.2mm×0.2mm
12
．超薄切片：切片厚度
50-90nm
13
．染色：鈾染色
5~15min
清洗
鉛染色
5~10min
清洗
二、掃描電鏡樣品常規制備規程
1
．取材：根據實驗目的取材，要求部位準確
2
．清洗：用磷酸緩沖液反復清洗樣品表面的灰塵、雜質等附著物
3
．固定：用
2%-3%
的戊二醛固定
2
小時
4
．清洗：用磷酸緩沖液清洗
3
次，每次
10 min
5
．脫水：用
50%
、
70%
、
80%
、
90%
乙醇梯度脫水各
15min
，再用
100%
乙醇脫水
3
次，每次
30min
；
6
．置換：用叔丁醇置換
3
次，每次
30min
7
．干燥：用冷凍干燥儀干燥樣品
8
．粘樣：用雙面膠帶將樣品粘到樣品臺上
9
．鍍膜：用離子濺射儀給樣品鍍
10nm
金膜
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